MethylFlash Global DNA Hidroximetría

Descripción del producto

El MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation (5-hmC) ELISA Easy Kit (Colorimetric) es un conjunto completo de tampones y reactivos optimizados para cuantificar colorimétricamente el estado de hidroximetilación del ADN global mediante la medición específica de los niveles de 5-hidroximetilcitosina (5-hmC. ) de forma simplificada, formato similar al ELISA de “un solo paso”.

Como tecnología de cuarta generación de la popular técnica de metilación global del ADN de Epigentek, supone un perfeccionamiento del kit predecesor MethylFlash al mejorar la velocidad, simplicidad, sensibilidad y reproducibilidad. Este kit también está optimizado específicamente para su uso junto con el kit MethylFlash Global DNA Methylation (5-mC) ELISA Easy (colorimétrico) para cuantificar simultáneamente tanto el ADN metilado como el hidroximetilado.

Este kit presenta las siguientes ventajas y características

• Rápido: pasos reducidos, por lo que el procedimiento completo sólo dura 2 horas.
• Robusto: la composición mejorada del kit permite que el ensayo tenga una “ventana de señal” más amplia con una variación reducida entre réplicas
• Cómodo: ruido de fondo inherentemente bajo, lo que elimina la necesidad de pasos de desnaturalización del ADN y bloqueo de la placa
• Sensible: el límite de detección puede ser tan bajo como 0,01% de ADN hidroximetilado a partir de 100 ng de ADN de entrada
• Específico: alta especificidad para 5-hmC, sin reactividad cruzada con citosina no metilada o citosina metilada dentro del rango de concentración indicado del ADN de muestra
• Universal: controles positivos y negativos que permiten la detección de la hidroximetilación del ADN en cualquier especie a partir de ADN de entrada monocatenario o bicatenario
• Preciso: controles positivos optimizados que pueden fraccionarse en una escala porcentual, lo que permite que el ensayo sea más preciso y altamente comparable con el análisis HPLC-MS
• Flexible – El formato de microplaca de pocillos en tira hace que el ensayo esté disponible para el análisis manual o de alto rendimiento basado en un ensayo duplicado de una sola muestra.

Fondo

Se ha descubierto que la 5-hidroximetilcitosina (5-hmC), como sexta base del ADN con funciones en la regulación de la transcripción, es abundante en cerebros humanos y de ratón y en células madre embrionarias (ES). En los mamíferos, puede generarse por oxidación de la 5-mC, una reacción mediada por la familia de las 5-mC-hidroxilasas de translocación diez-once (TET). Se ha demostrado que la 5-hmC es específica de cada tejido, desde niveles indetectables en líneas celulares cultivadas hasta el 0,6% en tejidos cerebrales humanos, y puede alcanzar el 8% del ADN total en algunas otras especie.

Recientemente se ha reconocido la importancia biológica de la 5-hmC como una importante modificación epigenética en el fenotipo y la expresión génica. Por ejemplo, la disminución global del contenido de 5-hmC (hipometilación del ADN) se ha demostrado en casi todos los cánceres y también se ha propuesto como marcador molecular y diana terapéutica en el cáncer.

Principio y procedimiento

Este kit contiene todos los reactivos necesarios para la cuantificación de la hidroximetilación global del ADN. En este ensayo, el ADN se une a pocillos de tiras que se tratan específicamente para tener una alta afinidad por el ADN. La fracción hidroximetilada del ADN se detecta utilizando un complejo de detección basado en mAb 5-hmC en un solo paso y luego se cuantifica colorimétricamente mediante la lectura de la absorbancia en un espectrofotómetro de microplaca. El porcentaje de ADN hidroximetilado es proporcional a la intensidad DO medida.

Materiales para empezar

El ADN de entrada debe ser relativamente puro con una relación 260/280> 1,6 y puede diluirse con agua o tampón TE. La cantidad de ADN puede variar entre 20 ng y 200 ng por reacción. Sin embargo, recomendamos utilizar 100 ng de ADN, que es la cantidad de entrada optimizada para obtener los mejores resultados.

Fuentes :

1. Gentaur
2. NCBI